Importancia biológica de la microcistina en aguas de riego y alternativas en su detección y degradación / Biological importance of microcistin in irrigation and alternative waters in its detection and degradation

Introducción: Las cianobacterias son microrganismos fotosintéticos, con capacidad de sintetizar una gran diversidad de metabolitos secundarios de interés para la industria, pero también han llamado la atención en las últimas décadas las toxinas denominas cianotoxinas, metabolitos que causan distintas alternaciones fisiológicas hasta llegar ocasionar la muerte de diferentes especies. Metodología: La determinación del estado de arte para el tema de cianobacterias se basó en una búsqueda bibliográfica en la base de datos especializada como Elservier, Springer, Google académico y MDPI basadas en palabras clave en español e inglés "microcistinas", "degradación de MC" y "cuantificación y detección de MC". Resultados: En la presente revisión considera dos áreas de caracterización de la microcistinas (MCs) las propiedades fisicoquímicas y propiedades biológicas, para entender su comportamiento e importancia tóxica en los sembradíos agrícolas y en la salud humana. Además de comprender alternativas para su degradación, por métodos fisicoquímicos como fotocatálisis y la gradación biológica por bacterias. Finalmente se mencionará algunos métodos actuales y en desarrollo, para la detección y cuantificación de estas MCs en ambientes acuáticos. Conclusiones: Las MCs tienen el potencial contaminar fuentes de agua como ríos y lagunas, causando daños a la salud humana y a las plantas agrícolas, tienen la capacidad de tolerar distintos cambios drásticos en factores fisicoquímicos y biológicos. Entre las alternativas reportadas la degradación bacteriana promete ser la más confiable. Finalmente, entre los distintos métodos para la detección de MCs, entre los métodos más aplicados son los inmunoensayos, debido a su versatilidad y estabilidad del método.

Introduction: Cyanobacteria are photosynthetic microorganisms, with the capacity to synthesize a great diversity of secondary metabolites of interest to the industry, but toxins called cyanotoxins have also attracted attention in recent decades, metabolites that cause different physiological alterations until they cause the death of different species. Methodology: The determination of the state of the art for the subject of cyanobacteria was based on a bibliographic search in specialized databases such as Elservier, Springer, Google Scholar and MDPI based on keywords in Spanish and English "microcystins", "MC degradation " and "quantification and detection of MC". Results: In the present review, two areas of characterization of microcystins are considered: the physicochemical properties and biological properties of microcystins (MC), to understand their behavior and toxic importance in agricultural crops and in human health.In addition to understanding alternatives for their degradation, by physicochemical methods such as photocatalysis and biological grading by bacteria.Finally, some current and developing methods will be mentioned for the detection and quantification of these MCs in aquatic environments. Conclusions: MCs have the potential to contaminate water sources such as rivers and lagoon, causing damage to human health and agricultural plants, they have the ability to tolerate different drastic changes in physicochemical and biological factors. Among the reported alternatives, bacterial degradation promises to be the most reliable. Finally, among the different methods for the detection of MCs, among the most applied methods are immunoassays, due to their versatility and stability of the method.

Evaluación de la prueba Aspergillus Galactomannan Ag VircliaR Monotest como alternativa a kit Platelia ™ Aspergillus EIA / Evaluation of the Aspergillus Galactomannan ag VircliaR Monotest test as an alternative to Platelia™ Aspergillus EIA kit

INTRODUCCIÓN: La prueba Aspergillus galactomannan Ag Virclia® (GM-VClia) es una técnica de galactomanano monotest, auto-matizada, basada en inmunoensayo quimioluminiscente (CLIA). OBJETIVO: Evaluar el desempeño del test de GM-VClia en muestras de suero y lavado bronquioalveolar (LBA) procesadas previamente con el kit Platelia™ Aspergillus EIA (GM-Plat). MATERIALES Y MÉTODOS: Se estudiaron 56 muestras de suero y 40 de LBA, correspondientes a un total de 59 pacientes (algunos con determinación de galactomamano en ambas muestras) con enfermedades pulmonares, hematológicas, LES, Covid-19 y tumores, entre otros. Trece pacientes tuvieron aspergilosis invasora (1 probada y 12 probables). RESULTADOS: La correlación entre ambos métodos para suero y LBA fue r = 0,8861 p < 0,0001 y r = 0,6368 p < 0,001, respectivamente. Hubo una concordancia global de 67,7% (65/96), siendo de 85,7% (48/56) en sueros y 42,5,0% (14/49) en LBA. Al subir el punto de corte en LBA por GM-VClia la concordancia aumentó a 85,7%. CONCLUSIONES: Se observó una mayor correlación y concordancia en sueros que en LBA. El kit GM-VClia presentó una mayor sensibilidad y valor predictor negativo (VPN), que el kit GM-Plat. Las desventajas de GM-VClia, la constituyen la categoría "dudoso", que dificulta la interpretación y que, con los puntos de corte actuales en LBA, la correlación con GM-Plat es menor. Las ventajas son su mayor sensibilidad, facilidad de procesamiento y una mayor rapidez en los resultados.

BACKGROUND: The Aspergillus Galactomannan Ag Virclia® (GMVClia) test is a monotest and automated galactomannan technique based on chemiluminescent immunoassay (CLIA). AIM: To evaluate the performance of the GM-VClia test in serum and bronchioalveolar lavage (BAL) samples previously processed with the Platelia ™ Aspergillus EIA kit (GM-Plat). METHODS: 56 samples of serum 40 from BAL (some of them with galactomaman determination in both samples), from patients with pulmonary diseases, hematological diseases, SLE, Covid-19 and tumors, among others, were studied. Thirteen patients had invasive aspergillosis (1 proven and 12 probable). RESULTS: The correlation between both methods for serum and BAL was r = 0.8861 p < 0.0001 and r = 0.6368 p < 0.001, respectively. There was a global concordance of 67.7% (65/96), being 85.7% (48/56) in sera and 42.5.0% (14/49) in BAL. By raising the cut-off point in LBA by GM-VClia, the agreement increased to 85.7%. CONCLUSION: A greater correlation and concordance was observed in sera than in BAL. The GM-VClia kit had a higher sensitivity and NPV than the GM-Plat kit. The disadvantages of GM-VClia are the "doubtful" category, which makes interpretation difficult and that with the current cut-off points in LBA the correlation with GM-Plat is lower. The advantages are its greater sensitivity, ease of processing and faster results.

Verificación del desempeño general del método Elecsys® Chagas en la detección de anticuerpos específicos contra Trypanosoma cruzi / Verification of the general performance of the Elecsys® Chagas method in the detection of specific antibodies against Trypanosoma cruzi

Resumen La enfermedad de Chagas es una parasitosis producida por Trypanosoma cruzi, prevalente principalmente en el continente americano, y observada en regiones no endémicas, producto de viajes y migraciones. El objetivo de este estudio fue comparar el desempeño del ensayo Elecsys® Chagas (Roche Diagnostics Alemania) (ECLIA) para el diagnóstico de la infección chagásica crónica con el método estándar y evaluar su posible empleo en reemplazo del método automatizado existente. Se estudiaron 77 muestras de sueros pertenecientes a pacientes con diagnóstico presuntivo de enfermedad de Chagas, procesadas por los distintos métodos disponibles en la Sección Parasitología del Hospital Muñiz: inmunoensayo quimioluminiscente de micropartículas (CMIA) (Abbott), enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA) (Wiener) y hemaglutinación indirecta (HAI) (Lab. Lemos S.R.L.). Los resultados de los métodos ELISA y HAI fueron comparados con los obtenidos en la prueba ECLIA, y estos a su vez con el método automatizado disponible. De las muestras analizadas, 22 (28,57%) presentaron IgG anti-T. cruzi y 55 (71,43%) resultaron negativas. Con el método ECLIA se logró un 100% en los parámetros de desempeño, con diferencias en los intervalos de confianza. La razón de verosimilitud positiva y la razón de verosimilitud negativa clasificaron al ensayo como excelente y la potencia global del test apoyó esa afirmación. Los métodos inmunológicos automatizados ayudan a la performance diagnóstica en la etapa crónica de la enfermedad de Chagas, permiten minimizar errores, favorecen la velocidad de emisión de los resultados y, debido a su alta sensibilidad y especificidad, en ciertos escenarios podrían proponerse para usar como única técnica.

Abstract Chagas disease is a parasitosis caused by Trypanosoma cruzi, prevalent mainly in the American continent, and observed in non-endemic regions as a result of travel and migration. The objective of this study was to compare the performance of the Elecsys® Chagas (Roche Diagnostics Alemania) (ECLIA) assay for the diagnosis of chronic Chagas infection with the diagnostic standard, and to evaluate its possible use as a replacement for the existing automated method. A total of 77 serum samples belonging to patients with a presumptive diagnosis of Chagas disease were evaluated, processed by the different methods available in the Parasitology Section of Hospital Muñiz: microparticle chemiluminescent immunoassay (CMIA) (Abbott), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (Wiener) and indirect hemagglutination (HAI) (Lab. Lemos S.R.L). The results of the ELISA and HAI methods were compared with those obtained in the ECLIA test, and these in turn with the available automated method. Of the samples analysed, 22 (28.57%) presented IgG anti-T. cruzi and 55 (71.43%) were negative. With the ECLIA method, 100% was achieved in the performance parameters, with differences in the confidence intervals. The positive likelihood ratio and the negative likelihood ratio classify the essay as excellent, and the overall power of the test supports this statement. Automated immunological methods help diagnostic performance in the chronic stage of Chagas disease, allow minimising errors, favour the speed of issuance of results, and due to the high sensitivity and specificity, in certain scenarios, they could be proposed for use as single technique.

Resumo A doença de Chagas é uma parasitose causada pelo Trypanosoma cruzi, prevalente principalmente no continente americano, e observada em regiões não endêmicas em decorrência de viagens e migrações. O objetivo deste estudo foi comparar o desempenho do ensaio Elecsys® Chagas (Roche Diagnostics Alemanha) (ECLIA) para o diagnóstico da infecção crônica de Chagas com o método padrão e avaliar seu possível uso em substituição do método automatizado existente. Foram avaliadas 77 amostras de soro pertencentes a pacientes com diagnóstico presuntivo de doença de Chagas, processadas pelos diferentes métodos disponíveis na Seção de Parasitologia do Hospital Muñiz: imunoensaio quimioluminescente de micropartículas (CMIA) (Abbott), ensaio imunoenzimático de adsorção (ELISA) (Wiener) e hemaglutinação indireta (HAI) (Lab. Lemos S.R.L). Os resultados dos métodos ELISA e HAI foram comparados com os obtidos no teste ECLIA, e estes por sua vez com o método automatizado disponível. Das amostras analisadas, 22 (28,57%) apresentaram IgG anti-T. cruzi e 55 (71,43%) foram negativos. Com o método ECLIA, foram obtidos 100% nos parâmetros de desempenho, com diferenças nos intervalos de confiança. A razão de verossimilhança positiva e a razão de verossimilhança negativa classificam o ensaio como excelente, e a potencia geral do teste conformou essa afirmação. Os métodos imunológicos automatizados auxiliam no desempenho diagnóstico na fase crônica da doença de Chagas, permitem minimizar erros, favorecem a rapidez na emissão dos resultados e, devido à alta sensibilidade e especificidade, em determinados cenários, poderiam ser propostos para uso como técnica única.

Diagnostic accuracy of a SARS-CoV-2 rapid test and optimal time for seropositivity according to the onset of symptoms / Acurácia diagnóstica de um teste rápido para SARS-CoV-2 e tempo ótimo para a soropositividade a partir do início dos sintomas / Precisión diagnóstica del test rápido SARS-CoV-2 y período óptimo para la seropositividad según la aparición de síntomas

Point-of-care serological tests for SARS-CoV-2 have been used for COVID-19 diagnosis. However, their accuracy over time regarding the onset of symptoms is not fully understood. We aimed to assess the accuracy of a point-of-care lateral flow immunoassay (LFI). Subjects, aged over 18 years, presenting clinical symptoms suggestive of acute SARS-CoV-2 infection were tested once by both nasopharyngeal and oropharyngeal RT-PCR and LFI. The accuracy of LFI was assessed in periodic intervals of three days in relation to the onset of symptoms. The optimal cut-off point was defined as the number of days required to achieve the best sensitivity and specificity. This cut-off point was also used to compare LFI accuracy according to participants' status: outpatient or hospitalized. In total, 959 patients were included, 379 (39.52%) tested positive for SARS-CoV-2 with RT-PCR, and 272 (28.36%) tested positive with LFI. LFI best performance was achieved after 10 days of the onset of symptoms, with sensitivity and specificity of 84.9% (95%CI: 79.8-89.1) and 94.4% (95%CI: 91.0-96.8), respectively. Although the specificity was similar (94.6% vs. 88.9%, p = 0.051), the sensitivity was higher in hospitalized patients than in outpatients (91.7% vs. 82.1%, p = 0.032) after 10 days of the onset of symptoms. Best sensitivity of point-of-care LFI was found 10 days after the onset of symptoms which may limit its use in acute care. Specificity remained high regardless of the number of days since the onset of symptoms.

Os testes sorológicos no local de atendimento (point-of-care) para a infecção pelo SARS-CoV-2 têm sidos utilizados para o diagnóstico da COVID-19. Entretanto, não está plenamente elucidada a acurácia dos testes ao longo do tempo em relação ao início dos sintomas. Nosso objetivo foi de avaliar a acurácia, no local de atendimento, do imunoensaio de fluxo lateral (LFI). Pacientes com ≥ 18 anos de idade que apresentavam sintomas clínicos sugestivos de infecção aguda pelo SARS-CoV-2 foram testados uma vez com RT-PCR da nasofaringe e orofaringe, além do LFI. A acurácia do LFI foi avaliada com intervalos periódicos de 3 dias a partir do início dos sintomas. O ponto de corte ótimo foi definido como o número necessário de dias para atingir a melhor sensibilidade e especificidade. Esse ponto foi utilizado também para comparar a acurácia do LFI de acordo com a situação do paciente (ambulatorial ou hospitalizado). Foram incluídos 959 pacientes, dos quais 379 (39,52%) testaram positivos para SARS-CoV-2 pelo RT-PCR e 272 (28,36%) pelo LFI. Foi atingido o melhor desempenho para o LFI com 10 dias a partir do início dos sintomas, com sensibilidade e especificidade de 84,9% (IC95%: 79,8-89,1) e 94,4% (IC95%: 91,0-96,8), respectivamente. Embora a especificidade não tenha sido diferente entre os grupos de pacientes (94,6% vs. 88,9%, p = 0,051), a sensibilidade foi mais alta nos pacientes hospitalizados que nos ambulatoriais (91,7% vs. 82,1%, p = 0,032) no dia 10 depois do início dos sintomas. A melhor sensibilidade do LFI no local de atendimento ocorre 10 dias depois do início dos sintomas, o que pode limitar seu uso no atendimento agudo. A especificidade permanece alta, independentemente do número de dias desde o início dos sintomas.

Los puestos de atención para pruebas serológicas del SARS-CoV-2 han sido usado para la diagnosis de la COVID-19. No obstante, su precisión a lo largo del tiempo, en lo que respecta a la aparición de los síntomas, no se ha comprendido completamente. Nuestro objetivo fue evaluar la precisión de un puesto de atención de inmunoanálisis de flujo lateral (LFI). Se hizo pruebas a individuos ≥ 18 años, presentando síntomas clínicos compatibles con una infección aguda de SARS-CoV-2, tanto vía nasofaríngea y orofaríngea RT-PCR, como LFI. La precisión de LFI fue evaluada en intervalos periódicos de 3 días con respecto a la aparición de los síntomas. El punto óptimo de corte se definió como el número de días requerido para alcanzar la mejor sensibilidad y especificidad. Este punto también se usó para comparar la precisión del LFI, según el estatus de los participantes: ambulatorios u hospitalizados. Se incluyeron a 959 pacientes, 379 (39,52%) dieron positivo en las pruebas de SARS-CoV-2 RT-PCR, y 272 (28,36%) fueron positivos en los LFI. Se alcanzó el mejor rendimiento de los LFI tras 10 días de la aparición de los síntomas, con una sensibilidad y especificidad de un 84,9% (IC95%: 79,8-89,1) y 94,4% (IC95%: 91,0-96,8), respectivamente. A pesar de que la especificidad no fue diferente (94,6% vs. 88,9%, p = 0,051), la sensibilidad fue mayor en pacientes hospitalizados que en los ambulatorios (91,7% vs. 82,1%, p = 0,032) tras 10 días desde la aparición de los síntomas. La mejor sensibilidad LFI del puesto de cuidado se produce tras 10 días de la aparición de los síntomas, lo que quizás limite su uso en el cuidado de urgencias. La especificidad permanece alta independientemente del número de días desde la aparición de los síntomas.

Evaluation of seven SARS-CoV-2 rapid IgM/IgG tests

RESUMEN Introducción: A finales de 2019, se detectó un nuevo coronavirus en China que provocó una enfermedad respiratoria aguda conocida como COVID-2019. Objetivo: Evaluar siete sistemas comerciales para la detección rápida de anticuerpos para determinar su sensibilidad, especificidad y robustez en nuestras condiciones para ser utilizados por el Sistema Nacional de Salud. Métodos: Se evaluaron siete sistemas para la detección de anticuerpos IgM/IgG. Se conformó un panel de evaluación con muestras de individuos negativos, sueros de otras afecciones previas a la pandemia y de pacientes positivos con la enfermedad. Resultados: Las cifras de sensibilidad general oscilan entre el 25 % y el 88 %, siendo los sistemas Realy Tech y Deep Blue los que mostraron los mejores resultados. La especificidad para ambos fue del 100 %. La tasa de IgM positiva según Realy Tech o Deep Blue aumentó a 94,1 % o 81,8 % en la etapa tardía de la enfermedad. Conclusiones: Los sistemas Realy Tech y Deep Blue detectaron IgM/IgG en suero y en sangre total con adecuada sensibilidad y especificidad. La reactividad cruzada no parece ser un problema. La serología en el caso de COVID-19 no puede utilizarse como diagnóstico pero permite a la vigilancia epidemiológica conocer el estado inmunológico de las poblaciones. Es fundamental analizar la respuesta inmune frente a la infección para realizar la caracterización epidemiológica y potencialmente informar el riesgo individual de futuras enfermedades y el estudio de posibles vacunas.

ABSTRACT Introduction: In late 2019, a new coronavirus was detected in China causing an acute respiratory illness known as COVID-2019. Objective: Evaluate seven commercial systems for the rapid detection of antibodies to determine their sensitivity, specificity and robustness in our conditions to be used by the National Health System. Methods: Seven systems were evaluated for the detection of IgM/IgG antibodies. Evaluation panel with samples from negative individuals, sera from other pathologies prior to the pandemic and from positive patients with the disease were conformed. Results: General sensitivity figures range between 25 and 88%, with the Realy Tech and Deep Blue systems showed the best results. The specificity for both was 100%. The IgM positive rate according to Realy Tech or Deep Blue increased to 94.1 or 81.8% in the late stage of the disease. Conclusions: Realy Tech and Deep Blue systems detected IgM/IgG in serum and in whole blood with adequate sensitivity and specificity. Cross-reactivity does not seem to be a problem. Serology in the case of COVID-19 cannot be used as a diagnostic but it allows epidemiological surveillance to know the immune status of populations. It's essential to analyze the immune response against the infection to carry out epidemiological characterization and potentially inform individual risk of future disease and the study of potential vaccines.

Detección de anticuerpos anti virus hepatitis E IgG e IgM utilizando un método automatizado: experiencia de un hospital universitario / Detection of anti-virus hepatitis e IgG and IgM antibodies using an automated method: experience of a university hospital

Resumen La determinación de anticuerpos anti virus hepatitis E (anti-VHE) tiene gran variabilidad dependiendo del ensayo utilizado. En 2015, con un método ELISA manual, publicamos una seroprevalencia de anti-VHE IgG de 32,6% en pacientes con estudio de hepatitis. Existen escasas publicaciones de anti-VHE IgM. Recientemente, se desarrolló el primer método automatizado y en el presente estudio comunicamos la experiencia obtenida. Se analizaron los resultados de 272 pacientes con estudio de anti-VHE IgG y/o IgM mediante técnica automatizada ELFA (VIDAS®), entre mayo de 2018 y agosto de 2020. Se encontró 25,8% (68/264) de positividad para anti-VHE IgG y 3,5% (9/259) para anti-VHE IgM. Cuatro muestras tuvieron ambos anticuerpos positivos. La seropositividad de anti-VHE IgG aumentó con la edad. En conclusión, la seroprevalencia de anti-VHE IgG obtenida fue similar a la publicada previamente. Considerando las ventajas de los ensayos IgM e IgG anti-VHE en el sistema VIDAS®, parecen ser nuevas herramientas valiosas en el estudio serológico de VHE.

Abstract The determination of anti-hepatitis E virus antibodies (anti-HEV) has a high variability depending on the assay used. In 2015, with a manual ELISA method, we reported anti-HEV IgG seroprevalence of 32.6% in patients under hepatitis study. There are few reports of anti-HEV IgM. Recently, it was developed the first automated method and in the present study, we report the experience using this new method. Between May 2018 and August 2020, the results of 272 patients with an anti-HEV IgG and/or IgM study were analyzed using the automated ELFA technique (VIDAS®). Seroprevalence was 25.8% (68/264) for anti-HEV IgG and 3.5% (9/259) for anti-HEV IgM. Four samples were positive for both antibodies. Anti-HEV IgG seropositivity increased with age. In conclusion, the seroprevalence of anti-HEV IgG obtained was similar to previously reported. Taking into account the advantages of these assays, anti-HEV IgM and IgG assays on VIDAS® system, seem to be valuable new tools in serological study of HEV.

Colonización rectal por Enterobacterales productores de múltiples carbapenemasas: Reporte de un caso de coproducción / Rectal colonization by Enterobacterales producing multiple carbapenemases: a co-production case report

Resumen El constante aumento de Enterobacterales productores de carbapenemasas (CPE) se constituye en un problema de salud pública a nivel mundial, por el impacto generado en la mortalidad de los pacientes. El tracto gastrointestinal es el principal reservorio de este tipo de microorganismos, por lo cual, la colonización rectal se convierte en un importante factor de riesgo para el desarrollo de posteriores infecciones. Una de las estrategias de vigilancia epidemiológica activa, es la búsqueda de pacientes colonizados, a través de cultivos de tamización para detectar estos microrganismos multirresistentes. Reportamos el caso de un paciente, con historia de sepsis de origen pulmonar, colonizado por Klebsiella pneumoniae con coproducción de carbapenemasas NDM + KPC y Escherichia coli con carbapenemasa NDM. Este hallazgo es cada vez más frecuente, lo cual implica un reto en su detección y diagnóstico. Se describen características del paciente, procedimientos realizados y hallazgos microbiológicos.

Abstract The constant increase in carbapenemase-producing Enterobacterales (CPE) constitutes a public health problem worldwide, due to the impact generated on the mortality of patients. The gastrointestinal tract is the main reservoir for this microorganism, which is why, rectal colonization becomes an important risk factor for the development of subsequent infections. One of the active epidemiological surveillance strategies is the search for colonized patients through screening cultures, to detect these multi-resistant microorganisms. We report the case of a patient, with a history of sepsis of pulmonary origin, colonized by Klebsiella pneumoniae with co-production of NDM + KPC carbapenemases and NDM carbapenemase-producing Escherichia coli. This finding is more and more frequent, which implies a challenge in its detection and diagnosis. Patient characteristics, procedures performed and microbiological findings are described.

Determinación de anticuerpos anti-dsDNA: evaluación del desempeño de un inmunoensayo quimioluminiscente y correlación con el método de inmunofluorescencia indirecta / Detection of anti-dsDNA antibodies: evaluation of performance of a chemiluminescent immunoassay and correlation to the indirect immunofluorescence assay / Determinação de anticorpos anti-dsDNA: avaliação do desempenho de um imunoensaio quimioluminiscente e correlação com o método de imunoflourescência indireta

Resumen La determinación de anticuerpos anti-dsDNA es de utilidad para el diagnóstico y seguimiento clínico de pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES) y es uno de los criterios de clasificación del SLICC-2012. El objetivo del estudio fue verificar el desempeño del inmunoensayo quimioluminiscente (CLIA) QUANTA Flash dsDNA y compararlo con el método en uso de inmunofluorescencia indirecta en Crithidia luciliae (CLIFT). Se analizaron con ambos métodos 195 pacientes con diagnóstico de enfermedades del tejido conectivo y solicitud de anticuerpos anti-dsDNA. Se obtuvieron 38 sueros positivos, 133 negativos y 24 (12,3%) discordantes. Entre estos resultados discordantes, hubo 17 que correspondieron a pacientes con LES y se agruparon en 16 CLIA+/CLIFT- y 1 CLIA-/CLIFT+. Se verificó el desempeño para precisión siguiendo el protocolo EP15-A2 y la linealidad. Se estudió la concordancia mediante el coeficiente Kappa y la correlación con el coeficiente Rho de Spearman. Se observó mayor sensibilidad diagnóstica para CLIA. El grado de acuerdo fue moderado y se obtuvo buena correlación entre los valores cuantitativos de CLIA y los títulos de CLIFT. De acuerdo al buen desempeño encontrado y a los resultados discordantes analizados, la mejor estrategia para la implementación de CLIA sería utilizarla en combinación con CLIFT, lo que aumentaría la sensibilidad diagnóstica sin perder especificidad.

Abstract The detection of anti-dsDNA antibodies is useful for diagnosis and clinical monitoring of patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and it is part of the classification criteria according to SLICC 2012. The purpose of this study was to verify the performance of the chemiluminescent immunoassay (CLIA) QUANTA Flash dsDNA and to compare it with the method currently in use, i.e the indirect immunofluorescence in Crithidia luciliae (CLIFT). One hundred and ninety five patients, who presented connective tissue diseases and required the study of anti-dsDNA antibodies, were analyzed. Thirty eight positive serum samples were obtained, 133 were negative and 24 (12.3%) in disagreement. Within the discordant results, there were 17 that corresponded to patients with SLE and they were grouped in 16 CLIA+/CLIFT- and 1 CLIA-/CLIFT+. The accuracy performance was assessed according to the EP15-A2 protocol and linearity. Concordance and correlation were calculated with the Kappa and Spearman's Rho coefficient, respectively. Based on the good performance observed and the discordant results analyzed, the best strategy for CLIA implementation would be to combine it with CLIFT, which would increase the diagnostic sensitivity without losing specificity.

Resumo A determinação dos anticorpos anti-dsDNA é de utilidade para o diagnóstico e seguimento clinico de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (LES) e é um dos critérios de classificação do SLICC 2012. O objetivo do estudo foi verificar o desempenho do imunoensaio quimioluminescente (CLIA) QUANTA Flash dsDNA e compará-lo com o método em uso imunofluorescência indireta em Crithidia luciliae (CLIFT). Foram analisados com os dois métodos, 195 pacientes com diagnóstico de doenças do tecido conjuntivo e solicitude de anticorpos anti-dsDNA. Os resultados foram agrupados em 38 soros positivos, 133 negativos e 24 (12,3%) discordantes. Entre esses resultados discordantes, 17 corresponderam a pacientes com LES e se agruparam em 16 CLIA+/CLIFT- e 1 CLIA-/CLIFT+. Foi verificado o desempenho para precisão seguindo o protocolo EP15-A2 e a linearidade. Foi estudada a concordância mediante o coeficiente Kappa e correlação com o coeficiente Rho de Spearman. Observou-se maior sensibilidade diagnóstica para CLIA. O grau de acordo foi moderado e boa correlação foi observada entre os valores quantitativos de CLIA e os títulos de CLIFT. Com base no bom desempenho encontrado e nos resultados discordantes analisados, a melhor estratégia para implementar o CLIA seria utilizá-lo em combinação com o CLIFT, o que aumentaria a sensibilidade do diagnóstico sem perder a especificidade.

Performance evaluation of a Sars-CoV-2 rapid test and two automated immunoassays / Avaliação do desempenho de teste rápido e de dois imunoensaios automatizados para Sars-CoV-2

ABSTRACT Introduction: Due to urgency and demand of a response to the Covid-19 pandemic, numerous Sars-CoV-2 immunoassays have been rapidly developed. Objective: This study aimed at assessing the performance of rapid Sars-CoV-2 antibody test in comparison to high-throughput serological assays. Methods: A total of 86 serum samples were evaluated in the three assays: a lateral flow immunoassay - Wondfo Sars-CoV-2 Antibody Test (WRT) - and two chemiluminescence immunoassays: Elecsys Anti-Sars-CoV-2 (ECLIA), and Sars-CoV-2 IgG (CMIA-IgG). Results: The estimated diagnostic sensitivities of serological tests in the evaluation of serum samples from the epidemiological survey were: WRT 59% [95% confidence interval (CI) 43.4%-72.9%], ECLIA 66.7% (51%-79.4%), and CMIA-IgG 61.5% (47.1%-73%). Meanwhile, the estimated diagnostic specificity was for WRT 78.7% (95% CI 65.1%-88%), ECLIA 72.3% (58.2%-83.1%), and CMIA-IgG 76.6% (74%-95.5%). The sensitivity and specificity values were lower than manufacturers' claimed. Although 16.2% (14/86) of serological results were discordant among the three Sars-CoV-2 serological assays, the degree of agreement by the kappa index was adequate: WRT/CMIA-IgG [0.757 (95% CI 0.615-0.899)], WRT/ECLIA [0.715 (0.565-0.864)], and ECLIA/CMIA-IgG [0.858 (0.748-0.968)]. Conclusion: The serological testing may be a useful diagnostic tool, which reinforces its careful evaluation, and, as well as the correct time to use it.

RESUMEN Introducción: Debido a la urgencia y la demanda de una respuesta a la pandemia de Covid-19, se han desarrollado rápidamente numerosos inmunoensayos del Sars-CoV-2. Objetivo: Este estudio tuvo como objetivo evaluar el rendimiento de la prueba rápida de anticuerpos contra el Sars-CoV-2 en comparación con los ensayos serológicos de alto rendimiento. Métodos: Se evaluaron un total de 86 muestras de suero en los tres ensayos: un inmunoensayo de flujo lateral - Wondfo Sars-CoV-2 Antibody Test (TRW) - y dos inmunoensayos de quimioluminiscencia: Elecsys Anti-Sars-CoV-2 (ECLIA) y Sars-CoV-2 IgG (CMIA-IgG). Resultados: Las sensibilidades diagnósticas estimadas de las pruebas serológicas en la evaluación de muestras de suero de la encuesta epidemiológica fueron: WRT 59% [intervalo de confianza (IC) del 95%: 43,4%-72,9%], ECLIA 66,7% (51%-79,4%) y CMIA-IgG 61,5% (47,1%-73%). Mientras tanto, la especificidad diagnóstica estimada fue para WRT 78,7% (95% CI 65,1%-88%), ECLIA 72,3% (58,2%-83,1%) y CMIA-IgG 76,6% (74%-95,5%). Los valores de sensibilidad y especificidad fueron más bajos que los declarados por los fabricantes. Aunque el 16,2% (14/86) de los resultados fueron discordantes entre los tres ensayos serológicos del Sars-CoV-2, el grado de concordancia del índice kappa fue adecuado: WRT/CMIA-IgG [0,757 (IC del 95%: 0,615-0,899)], WRT/ECLIA [0,715 (0,565-0,864)] y ECLIA/CMIA-IgG [0,858 (0,748-0,968)]. Conclusión: La prueba serológica puede ser una herramienta diagnóstica útil, lo que refuerza su evaluación cuidadosa, así como el momento adecuado para usarla.

RESUMO Introdução: Em função da urgência e demanda de uma resposta à pandemia do novo coronavírus (Covid-19), vários testes de detecção de anticorpos para a síndrome respiratória aguda grave do coronavírus 2 (Sars-CoV-2) têm sido desenvolvidos. Objetivo: Este estudo teve como objetivo avaliar o desempenho do teste rápido utilizado em um inquérito epidemiológico para Sars-CoV-2 em comparação com outros ensaios sorológicos. Métodos: Foram avaliadas 86 amostras de soro em três ensaios sorológicos: um imunoensaio de fluxo lateral - Wondfo Sars-CoV-2 Antibody Test (TRW) - e dois imunoensaios de quimioluminescência: Elecsys anti-Sars-CoV-2 (ECLIA) e Sars-CoV-2 IgG (CMIA-IgG). Resultados: As sensibilidades diagnósticas estimadas dos testes sorológicos na avaliação dessas amostras foram: TRW 59% [95% intervalo de confiança (IC) 43,4%-72,9%], ECLIA 66,7% (51%-79,4%) e CMIA-IgG 61,5% (47,1%-73%). Enquanto isso, a especificidade diagnóstica estimada para TRW foi 78,7% (95% CI 65,1%-88%), ECLIA 72,3% (58,2%-83,1%) e CMIA-IgG 76,6% (74%-95,5%). Os valores de sensibilidade e especificidade foram inferiores aos afirmados pelos fabricantes. Embora 16,2% (14/86) dos resultados tenham sido discordantes entre os três ensaios serológicos para Sars-CoV-2, o grau de concordância pelo índice Kappa foi adequado: TRW/CMIA-IgG [0,757 (95% IC 0,615-0,899)], TRW/ECLIA [0,715 (0,565-0,864)] e ECLIA/CMIA-IgG [0,858 (0,748-0,968)]. Conclusão: O teste sorológico pode ser uma ferramenta diagnóstica útil, o que reforça sua avaliação criteriosa, bem como o momento correto de sua utilização.

Performance evaluation of HIV infection diagnostic tests / Avaliação do desempenho de testes para diagnóstico da infecção pelo HIV

ABSTRACT Introduction: Many factors can impact the performance of diagnostic assays for the human immunodeficiency virus (HIV) infection, affecting the results of population surveys. Objective: The objective of this study was to evaluate the performance of point-of-care rapid tests (RT) used for HIV diagnosis as compared to conventional tests in blood samples from a population of transvestites and transsexual women. Methods: A total of 1,385 samples with HIV RT results were submitted to Instituto Adolfo Lutz for evaluation by conventional laboratory tests. Results: HIV positivity was confirmed by conventional laboratory tests in 100% of the 240 (17.3%) samples with reactive RT. However, 1,145 (82.7%) samples with non-reactive RT results were evaluated; three (0.3%) tested positive and one (0.1%), indeterminate for HIV. Although a proportion of discordant results were found, the point-of-care RTs showed a high confirmation rate when compared to the serological tests. Conclusion: The data of this study corroborate the importance of adopting effective management tools to ensure quality of HIV infection diagnosis.

RESUMEN Introducción: Muchos factores pueden impactar en el desempeño pruebas para diagnóstico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), comprometiendo los resultados de investigaciones poblacionales. Objetivo: El objetivo de este estudio fue evaluar el desempeño de pruebas rápidas (PR) en el punto de atención utilizadas para diagnosticar el VIH en relación con las pruebas convencionales en muestras de sangre de la población de travestis y mujeres transexuales en la ciudad de São Paulo, São Paulo, Brasil. Métodos: Un total de 1.385 muestras con resultados de PR de VIH se remitieron al Instituto Adolfo Lutz (IAL), para ser evaluadas por pruebas de laboratorio convencionales. Resultados: De las 240 (17,3%) muestras que presentaron resultado reactivo en las PR, positividad para VIH se confirmó en el 100% por pruebas de laboratorio convencionales. Sin embargo, de las 1.145 (82,7%) muestras evaluadas con resultado de PR non reactivo, tres (0,3%) se presentaron reactivas y una (0,1%), indeterminada para VIH. Aunque un porcentaje de resultados falsos negativos en las PR ha sido encontrado, las pruebas realizadas en el punto de atención poseen alta tasa de confirmación cuando comparadas con las pruebas serológicas. Conclusión: Los datos de este estudio resaltan la importancia de adoptar herramientas de gestión eficaces para garantizar la calidad del diagnóstico de la infección por VIH.

RESUMO Introdução: Muitos fatores podem impactar no desempenho dos testes para diagnóstico da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), comprometendo os resultados de pesquisas populacionais. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho dos testes rápidos (TR) - point-of-care - utilizados para o diagnóstico do HIV em relação aos ensaios convencionais em amostras de sangue da população de travestis e mulheres transexuais da cidade de São Paulo, São Paulo, Brasil. Métodos: Ao Instituto Adolfo Lutz (IAL), 1.385 amostras com os resultados dos TR do HIV foram encaminhadas para serem avaliadas por testes laboratoriais convencionais. Resultados: Das 240 (17,3%) amostras que apresentaram resultado reagente nos TR, a positividade para HIV foi confirmada em 100% por testes laboratoriais convencionais. Entretanto, das 1.145 (82,7%) amostras com resultado de TR não reagente avaliadas, três (0,3%) apresentaram-se reagentes e uma (0,1%), indeterminada para HIV. Embora uma porcentagem de resultados falso-negativos nos TR tenha sido encontrada, os testes realizados em campo possuem alta taxa de confirmação quando comparados com os testes sorológicos. Conclusão: Os dados deste estudo ressaltam a importância da adoção de ferramentas de gestão eficazes para assegurar a qualidade do diagnóstico da infecção por HIV.

Estudio de algunos biomarcadores para infecciones de transmisión sexual en un centro de inclusión social venezolano: período 2013-2018 / Study of biomarkers of sexually transmitted infections in a social inclusion center in Venezuela: 2013­2018

INTRODUCCIÓN: Las infecciones de transmisión sexual (ITS) se expresan con mayor frecuencia en poblaciones marginadas, como lo son los ciudadanos que se encuentran en situación de calle y con problemas de drogadicción. MATERIALES Y MÉTODOS: Mediante un estudio de campo descriptivo retrospectivo, se determinó la prevalencia de las ITS que se detallan en los ciudadanos residentes de un Centro de Inclusión Social en Venezuela durante los años 2013 a 2018. Para ello, suero de 280 individuos fue analizado mediante la prueba ELISA de diferentes compañías biotecnológicas. RESULTADOS: 50 casos (17,8%) fueron reactivos a cualquiera de las enfermedades investigadas. El biomarcador de mayor prevalencia durante el lapso estudiado fue el antiHBc con 13,9% y las menores fueron HBsAg con 0,75%, VHC con 0,71% y Treponema pallidum con 2,85%, así como 2,14% para VIH. No se detectó ningun caso de HTLV. Del mismo modo, se observó una tasa de co-infección entre hepatitis B y VIH de 2,32%, entre hepatitis C y VIH de 1,5% y en dos años se consiguió co-infeccion de hepatitis B y Sífilis con 1,5% y 5,8% en el 2014 y 2018 respectivamente. DISCUSIÓN: Se encontró que los sujetos acogidos en el Centro de Inclusión Social son un grupo vulnerable a las ITS y las coinfecciones, por lo que deben llevarse a cabo campañas de preven-ción y pruebas de detección de estas enfermedades en dicha población.

INTRODUCTION: Sexually Transmitted Infections (STIs) are most frequently expressed in marginalized populations, such as as homeless individuals or those with substance abuse issues. MATERIALS AND METHODS: Through a retrospective descriptive study, the prevalence of various STDs was determined among residents of a Social Inclusion Center in Venezuela from 2013 to 2018. For this purpose, serum from 280 individuals were analyzed with ELISA tests from different biotech companies. RESULTS: 50 cases (17.86%) were sero-reactive to any of the STIs investigated. The most preva-lent biomarker during the study period studied was antiHBc (13.9%) and the lowest prevalen-ces were HBsAg with 0.75%, HCV with 0.71%, and Treponema pallidum with 2.85%, as well as 2.14% for HIV. No cases of HTLV were detected. Similarly, there was coinfection between hepatitis B and HIV in 2.32% of cases, between hepatitis C and HIV in 1.5%, and between syphillis and hepatitis in 1,5% and 5,8% of cases (in 2014 and 2018 respectively). DISCUSSION: Individuals in Centers for Social Inclusion are at risk of presenting STIs and co-infections; therefore, STI prevention campaigns and screenings should be conducted in this vulnerable group.

Inmunoensayo multiplex para el diagnóstico simultáneo de diabetes mellitus autoinmune y enfermedad celíaca / Multiplex immunoassay for simultaneous diagnostic of autoimmune diabetes mellitus and celiac disease

Introducción: la diabetes mellitus autoinmune (DMA) y la enfermedad celíaca (EC) son enfermedades crónicas, poligénicas y multifactoriales vinculadas con la disfunción del sistema inmune. Dado que es frecuente que un mismo paciente presente ambas patologías, la detección simultánea de los marcadores de autoinmunidad de DMA y EC sería una estrategia racional para mejorar el diagnóstico. Objetivos: desarrollar un inmunoensayo basado en citometría de flujo (FloCMIA multiplex) para la detección simultánea y discriminativa de marcadores de DMA (GADA e IA-2A) y de EC (tTgA). Materiales y métodos: las muestras analizadas consistieron en sueros provenientes de 35 individuos controles normales y 21 pacientes con diabetes mellitus tipo 1 (DM1). Se empleó un modelo de "doble paratope" incubando los sueros con una mezcla de microesferas de diferente fluorescencia interna, cada una adsorbida con un autoantígeno: TrxGAD, TrxIA-2 o H6-tTg, y una mezcla de dichos autoantígenos biotinilados. Los inmunocomplejos se detectaron con estreptavidina-ficoeritrina y se adquirió en un citómetro de flujo. Resultados: FloCMIA multiplex detectó GADA en el 76,2% de los pacientes e IA-2A en el 52,38% (sensibilidad analítica: 88,24 y 56,25% respectivamente,y especificidad: 85,71%) y tTgA en el 42,86% (sensibilidad analítica: 50,0%, y especificidad: 80,0%). Estos resultados se contrastaron con el ensayo de unión de radioligando para GADA e IA-2A y se detectaron 80,95 y 76,19% de los sueros respectivamente (especificidad: 100%), y con un ELISA para tTgA se detectó un 38,1% (especificidad: 97,1%). Conclusiones: FloCMIA multiplex permitió detectar y discriminar GADA, IA-2A y/o tTgA, -en un único acto analítico- en sueros de pacientes con DMA y/o EC. El novedoso inmunoensayo desarrollado simplifica el screening de la población a gran escala

Introduction: autoimmune diabetes mellitus (ADM) and celiac disease (CD) are chronic, polygenic and multifactorial diseases associated with immune system dysfunction. As it is frequent that a patient presents both pathologies, the simultaneous detection of autoimmunity markers of ADM and CD would be a rational strategy to improve the diagnosis. Objectives: to develop an immunoassay based on Flow Cytometry (FloCMIA multiplex) for the simultaneous and discriminative detection of markers for ADM (GADA and IA-2A) and CD (tTgA). Materials and methods: thirty five serum samples of control individuals and 21 type 1 diabetes mellitus (T1DM) patients were assayed. A "double bridge" model was used for the assay, incubating the serum samples with a mixture of microspheres containing different amount of internal fluorescence, each one adsorbed with an autoantigen: TrxGAD, TrxIA-2 or H6-tTg, and a mixture of the same biotinilated autoantigens. The immunocomplexes were detected using streptavidinphycoerytrin and then acquired in a flow cytometer. Results: FloCMIA multiplex detected GADA in 76.2% of the patients; IA-2A in 52.38% (analytical sensitivity: 88.24% and 56.25% respectively, and specificity: 85.71%) and tTgA in 42.86% (analytical sensitivity: 50.0%, and specificity: 80.0%). These results were compared with the radioligand binding assay for GADA and IA-2A, detecting 80.95% and 76.19% of the serum samples respectively (100% specificity), and with an ELISA for tTgA detecting 38.1% (97.1% specificity). Conclusions: FloCMIA multiplex allowed detecting and discriminating GADA, IA-2A and/or tTgA, -in a single assay- in serum samples of ADM and/or CD. The novel developed immunoassay simplifies the screening of the large scale population

Evaluación del método de ELISA para detección de anticuerpos anti-cisticercos en sueros humanos / Evaluation of the ELISA method for the detection of anti-cysticercus antibodies in human sera / Avaliação do método ELISA para a detecção de anticorpos anti-cisticercos em soros humanos

La neurocisticercosis (NCC) es la localización en el sistema nervioso central (SNC) humano de la parasitosis provocada por el estadio larvario de la Taenia solium, el cisticerco, que prevalece en áreas urbanas y rurales y constituye un problema de salud pública. El diagnóstico puede efectuarse por exploración imagenológica del SNC con resonancia magnética o tomografía axial computarizada, no siempre disponible, y por pruebas de inmunoensayo (EIA) en sangre, que aportan al diagnóstico rapidez, bajo costo y transferibilidad. Para evaluar su capacidad diagnóstica y validar la precisión de la técnica de ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas), en la detección de anticuerpos anti-cisticercos en sueros humanos, se diseñó una seroteca en forma aleatoria y en doble ciego, y se realizó el ELISA con las muestras, utilizando placas sensibilizadas con antígenos obtenidos del fluido vesicular de cisticercos de T. solium. Para la validación se realizaron 20 ensayos empleando controles positivos y negativos, por cuadruplicado en diferentes días, y realizados por más de un operador; el punto de corte para este método fue una densidad óptica de 0,325. La precisión intralaboratorio para el control débil (media=0,532±0,09) fue de %CV=17,51±0,09, y un valor de repetibilidad de %CV=7,04±0,04, cifras que se encuentran dentro de los límites esperados para el método. Con estos resultados se puede concluir que la precisión del ELISA para el serodiagnóstico de NCC se encuentra validada. El ensayo validado proporcionó resultados coherentes y repetidos que permitieron discriminar entre dos resultados dicotómicos y establecer con exactitud la condición de una posible infección, con un nivel de certidumbre estadística predeterminado.

Neurocysticercosis (NCC) is the location in the human central nervous system (CNS) of the parasitosis caused by the larval stage of Taenia solium, the cysticercus which prevails in urban and rural areas, constituting a public health problem. Diagnosis can be made by CNS imaging with magnetic resonance or computerized axial tomography, not always available, and by blood immunoassay (EIA) tests, which provide rapidity, low cost and transferability. In order to evaluate its diagnostic capacity and validate the ELISA (Enzyme- Linked ImmunoSorbent Assay) technique in the detection of anti-cysticercus antibodies in human sera, a collection of sera was designed in a randomized and double-blind manner, and the ELISA was performed with the samples, using plates sensitized with antigens obtained from the vesicular fluid of T. solium cysticerci. Twenty trials were conducted, using positive and negative controls, in quadruplicate, on different days, and performed by more than one operator; the cutoff for this method was an optical density of 0.325. The intralaboratory precision for the weak control (mean=0.532±0.09) was %CV=17.51±0.09, and a repeatability value of %CV=7.04±0.04, figures that are within the expected limits for the method, It can be concludedthat the accuracy of the ELISA for serodiagnosis of NCC is validated. The validated test provided consistent and repeated results, which made it possible to discriminate between two dichotomous outcomes, and to establish with accuracy the condition of a possible infection, with a predetermined level of statistical certainty.

A neurocisticercose (NCC) é o local no sistema nervoso central (SNC) humano de parasitose causada pelo estágio larval da Taenia solium, o cisticerco, prevalecente em áreas urbanas e rurais, constituindo um problema de saúde pública. O diagnóstico pode ser feito por varredura imagenológica do SNC com ressonância magnética ou tomografia axial computadorizada, nem sempre disponível, e por testes de imunoensaio (EIA) em sangue, que fornecem ao diagnóstico rapidez, baixo custo e portabilidade. Para avaliar a sua capacidade de diagnóstico e validar a precisão da técnica de ELISA (ensaio imunoabsorvente ligado a enzimas), na detecção de anticorpos anti-cisticercos em soros humanos, um serrarium foi projetado em forma aleatória e em duplo cego, e foi realizado com as amostras o ELISA, utilizando placas sensibilizadas com antígenos derivados do fluido vesicular de cisticercos de T. solium. 20 testes para validação foram realizados, utilizando controles positivos e negativos, em quadruplicado, em dias diferentes, e realizados por mais de um operador; o ponto de corte para este método era uma densidade óptica de 0,325. A precisão intralaboratorial para o controle fraco (média=0,532±0,09) foi de CV%=17,51±0,09, e um valor de repetibilidade de CV%=7,04±0,04, valores que estão dentro dos limites esperados para o método, podendo concluir com esses resultados que a precisão do ELISA para diagnóstico sorológico de NCC é validado. O ensaio validado forneceu resultados consistentes e repetidos, o que permitiu discriminar entre dois resultados dicotômicos e identificar com exatidão a condição de possível infecção com um nível de certeza pré-determinado estatisticamente.

Implementación del algoritmo reverso para el cribado de sífilis en un laboratorio clínico / Implementation of the reverse screening syphilis algorithm in a clinical laboratory

Resumen Introducción: La sífilis sigue siendo un problema de salud pública en todo el mundo; la precisión de las pruebas de diagnóstico es fundamental para el éxito de su control. Actualmente, hay dos enfoques para el diagnóstico serológico de la sífilis: el algoritmo tradicional y el algoritmo reverso. Objetivo: Analizar las ventajas y desventajas en la implementación del cribado para sífilis con el algoritmo reverso en un laboratorio clínico de pacientes ambulatorios. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio de corte transversal analizando 246 sueros reactivos en el cribado sobre un total de 14.700 solicitudes de serología para sífilis. Se utilizaron los ensayos ARCHITECT SyphilisTP, V.D.R.L. y FTA-Abs. Resultados: De los 246 sueros reactivos por ARCHITECT Syphilis TP, 129 fueron reactivos y 117 no reactivos con V.D.R.L., éstos últimos resultaron 97 reactivos y 20 no reactivos por FTA-Abs, sugiriendo falsos positivos (0,13%). Se detectaron dos casos de infección primaria, no detectados con V.D.R.L y un caso de infección primaria en una gestante con un valor alto S/CO y V.D.R.L. de 1 dils. Conclusiones: Entre las ventajas de utilizar el algoritmo reverso se encontró mayor sensibilidad en la detección de sífilis primaria; automatización, trazabilidad, interpretación objetiva y resultados concluyentes.

Background: Syphilis remains a public health concern worldwide, the accuracy of diagnostic tests is critical for its successful control. Currently, there are two approaches to the diagnosis of syphilis using serological tests: the traditional algorithm and the reverse algorithm. Aim: The goal of this study was to analyse the advantages and disadvantages in the implementation of the syphilis reverse-screening algorithm in an outpatient clinical laboratory. Methods: An observational cross-sectional study was carried out analyzing 246 reactive sera from a total of 14700 requests for syphilis serology. Chemiluminescent assay ARCHITECT Syphilis TP, V.D.R.L. and FTA-Abs were performed. Results: Among 246 reactive sera by ARCHITECT Syphilis TP, 129 were reactive and 117 were non-reactive by V.D.R.L. the last mentioned resulted in 97 reactive and 20 non-reactive by FTA-Abs, suggesting false positives (0.13%). Two patients with primary infection were detected, that were not detected by V.D.R.L. and one pregnant woman with primary infection with a high value S/CO and V.D.R.L.:1 dils. Conclusions: Among the advantages of using a reverse algorithm were greater sensitivity in the detection of patients with primary syphilis; automation, complete traceability of the samples; objective interpretation and conclusive results.

Validación de inmunoensayos en fase sólida / Validation of solid phase immunoassays / Validação de imunoensaios em fase solida

La determinación del nivel de anticuerpos por medio de ensayos ELISA exige construir una curva de calibración según el modelo logístico de 4 parámetros (4PL); no obstante, es común que el bioquímico realice estimaciones y ajuste los datos de calibración con modelos alternativos. Se buscó determinar para un ensayo ELISA semicuantitativo el modelo que mejor ajusta los datos de calibración y cuál de los modelos alternativos explorados genera menor error relativo porcentual (ERP) al predecir las concentraciones de los calibradores. Para esto se empleó un ELISA indirecto y se ajustaron las densidades ópticas (DO) de los calibradores según los modelos i) exponencial ii) Boltzmann iii) Boltzmann semi log iv) Deming v) regresión lineal vi) 4PL vii) cuadrático. Se encontró que el mejor ajuste lo proveen los modelos v) (R2=0,9914), i) (R2=0,9652) y iii) (R2=0,9650). Sin embargo, los modelos i) y iii) tienen mejor desempeño en el procedimiento de ajuste inverso: el ERP se mantuvo ≤20% en el rango cubierto por los 6 calibradores (0-100 UI/mL). Los modelos lineales iv) y v) presentaron ERP elevados en el rango testeado. En resumen, el ajuste exponencial i) y el ajuste de Boltzmann iii), combinan valores de R2 y ERP comparables al modelo 4PL, por lo cual es inapropiado cualquier tipo de ajuste lineal.

Determination of the levels of specific antibodies by semiquantitative ELISAs requires the construction of a 4 parameter logistic regression (4PL) calibration curve. However, alternative models are often employed to adjust and estimate calibration data. The aims of this work were to determine the model that best adjusts calibration data, and which alternative model generates a lower relative percentage error (RPE) in the prediction of calibrator concentrations. An IgA anti-gliadin ELISA was used. The optical density values (OD) of calibrators were adjusted with the following mathematical models: i) Exponential, ii) Boltzmann, iii) Boltzmann semilog, iv) Deming, v) Linear regression, vi) 4PL, and vii) Quadratic. Results indicated that the best adjustment is given by models v) (R2=0.9914), i) (R2=0.9652) and iii) (R2=0.9650). However, models i) and iii) performed better in the reciprocal adjustment procedure: RPE values were ≤20% for all the calibrator levels analyzed (0-100 IU/mL). The linear models iv) and v) had high RPE values. To sum up, the exponential (i) and Boltzmann (iii) adjustments present R2 and RPE values similar to those of the 4PL, the use of any linear adjustment being inappropriate.

A determinação do nível de anticorpos por meio de ELISA requer a construção de uma curva de calibração de acordo com o modelo logístico de 4 parâmetros (4PL); no entanto, é comum o bioquímico fazer estimativas e ajustar os dados de calibração com modelos alternativos. Procurou-se determinar para um ensaio ELISA de modelo semiquantitativo o modelo que melhor se ajusta os dados de calibração e qual dos modelos alternativos explorados gera menor erro relativo percentual (ERP) ao prever as concentrações dos calibradores. Para isso, um ELISA indireto foi utilizado e se ajustaram as densidades ópticas (DO) dos calibradores segundo os modelos i) exponencial ii) Boltzmann iii) Boltzmann semi log iv) Deming v) regressão lineal iv) 4PL vii) quadrático. Verificou-se que o melhor ajuste é fornecido pelos modelos v) (R2= 0,9914), vi) (R2= 0,9652) e iii) (R2= 0,9650). No entanto, os modelos i) e iii) têm melhor desempenho no procedimento de ajuste inverso: o ERP permaneceu ≤20% na faixa coberta pelos 6 calibradores (0-100 UI/mL). Os modelos lineares iv) e v) apresentaram alto ERP na faixa testada. Em resumo, o ajuste exponencial i) e o ajuste de Boltzmann iii) combinam valores de R2 e ERP comparáveis ao modelo de 4PL, sendo inadequado qualquer tipo de ajuste linear.

Discrepancia en concentraciones de hormonas tiroideas libres medidas por distintos inmunoensayos / Discrepancy in concentrations of free thyroid hormones measured by different immunoassays

Abstract: Thyroid function is assessed by measuring thyrotropin and free and total thyroid hormone concentrations. There are interferences with the results of immunoassays that can lead to an incorrect diagnosis, of which the most frequent are the binding of thyroid hormones to heterophile antibodies, rheumatoid factor, anti-Ruthenium antibodies, the intake of biotin and anti-streptavidin antibodies. We present three cases of clinically euthyroid patients, with normal TSH, high free T4 and T3, and normal total T4 and T3 performed in a Roche Diagnostics ® COBAS 8000 device. When the test was repeated on a Siemens® Immulite device, the free and total hormones were within normal ranges. In the Roche Diagnostics ® assay, the presence of biotin or anti-Ruthenium or anti-streptavidin antibodies interferes with the formation of the complex responsible for the emission of light that allows inferring concentrations of thyroid hormones. The Siemens test works differently since the emission of light depends on the binding of T4 to an antibody conjugated with alkaline phosphatase not participating in the process biotin, streptavidin or ruthenium so this interference is avoided. This possible interference in immunoassays should be taken into account in case clinical manifestations differ from these laboratory determinations, to avoid a diagnosis and potential inappropriate treatment.

Resumen: La función tiroidea se evalúa midiendo tirotropina y concentraciones de hormonas tiroideas libres y totales. Existen interferencias con los resultados de inmunoensayos que pueden llevar a un diagnóstico incorrecto, de ellas, las más frecuentes son la unión de hormonas tiroideas a anticuerpos heterófilos, el factor reumatoide, anticuerpos anti Rutenio, la ingesta de biotina y anticuerpos anti estreptavidina. Se presentan tres casos de pacientes clínicamente eutiroideos, con TSH normal, T4 y T3 libres elevadas, y T4 y T3 totales normales realizadas en un equipo COBAS 8000 de Roche Diagnostics®. Cuando se repitió el ensayo en un equipo Immulite de Siemens®, las hormonas libres y totales estaban dentro de rangos normales. En el ensayo de Roche Diagnostics ®, la presencia de biotina o anticuerpos anti Rutenio o anti estreptavidina, interfiere con la formación del complejo responsable de la emisión de luz que permite inferir las concentraciones de las hormonas tiroideas. El ensayo de Siemens funciona de manera diferente ya que la emisión de luz depende de la unión de la T4 a un anticuerpo conjugado con fosfatasa alcalina no participando en el proceso biotina, estreptavidina o Rutenio por lo que se evita esta interferencia. Esta posible interferencia en inmunoensayos debe ser tenida en cuenta en caso de que las manifestaciones clínicas difieran de estas determinaciones de laboratorio, para evitar un diagnóstico y potencial tratamiento inadecuado.

Validación de un inmunoensayo tipo ELISA para la cuantificación de los niveles séricos de antígeno de superficie en pacientes con infección crónica por Virus de la Hepatitis B / Validation of an ELISA for quantitation of serum levels of surface antigen in patients with chronic hepatitis B

Resumen Introducción Durante la etapa aguda de la infección por el Virus de la Hepatitis B (VHB) y el período inicial de una infección crónica, el DNA está en forma episomal (libre o extracromosomal) y se replica en el hepatocito produciendo, entre otros, viriones infectivos, DNA polimerasa y antígeno de superficie del virus (HBsAg). Objetivo Validar un inmunoensayo tipo ELISA para cuantificar los niveles de HBsAg en pacientes con hepatitis B crónica. Método Se realizó un estudio experimental de desarrollo tecnológico. Se llevó a cabo la normalización y validación de un inmunoensayo enzimático heterogéneo de doble anticuerpo para la cuantificación de HBsAg en sueros de seres humanos. 115 muestras de pacientes con hepatitis B crónica con resultados de carga viral se correlacionaron con las concentraciones de HBsAg. Resultados y discusión El método presentó coeficientes de variación intra e interensayo de 9,8 y 13,2% respectivamente. El rango de trabajo se estimó entre 0.15 y 60 ng/mL. El porcentaje de recuperación estuvo entre el 90 y 110% y el ajuste lineal de la curva estándar presentó un coeficiente de determinación superior a 0,99. La correlación alcanzada entre los niveles de DNA y la concentración de HBsAg fue de 62.5%. Conclusiones La evaluación del ELISA para la cuantificación de HBsAg desarrollado en el laboratorio mostró que cumple los parámetros de validación para su uso clínico.

Abstract Introduction During the acute phase of infection with Hepatitis B Virus (HBV) and the initial period of chronic infection, DNA is episomally (free or extrachromosomal) and replicates in hepatocytes producing among other virions, DNA polymerase and virus surface antigen (HBsAg). Objective Validate an ELISA to quantify HBsAg levels in patients with chronic hepatitis B. Method An experimental study of technological developmentwas conducted. The normalization and validation of heterogeneous double antibody enzyme linked inmunoassay for quantitation of HBsAg in human sera was carried out. 115 serum samples from patients with chronic hepatitis B with viral load results were correlated with its HBsAg concentrations. Results and discussion The developed method presented variation coefficients intra and interassay of 9.8 and 13.2% respectively. The working range was estimated between 0.15 and 60 ng/mL. The recovery rate was between 90 and 110% and the linear fit of the standard curve presented a determination coefficient greater than 0, 99. The correlation between the DNA levels and HBsAg concentration was 62.5%. Conclusions The assessment of the ELISA for quantitation of HBsAg developed in the laboratory showed that it achieved validation parameters for its clinical use.

Estudio comparativo de la determinación de vitamina D por dos inmunoensayos / Comparative study of the determination of vitamin D by two immunoassays / Estudo comparativo da determinação de vitamina D por dois imunoensaios

La vitamina D es un metabolito que tiene gran importancia en la actualidad, debido al descubrimiento de nuevas funciones. La mejor manera de medir los niveles de vitamina D en el organismo es medir los niveles de 25(OH)vitamina D, pero hoy en día no existe estandarización entre métodos y, por lo tanto, existe gran variabilidad entre ellos. En los laboratorios clínicos los métodos más utilizados son los inmunoensayos y sólo ADVIA Centaur Vitamina D Total assay e IDS-iSYS 25-Hydroxy Vitamin D pasaron la primera fase del Vitamin D Standardization Certification Program (VDSCP) diseñado por el Centre for Diseases Control (CDC). En este estudio se compararon estos 2 inmunoensayos, pero a pesar de haber pasado la primera fase del VDSCP los resultados reflejaron que sigue existiendo variabilidad entre métodos y, por lo tanto, no son intercambiables, siendo necesario definir valores de referencia para cada método a la espera que el proceso de estandarización termine y exista buena correlación entre los diferentes métodos.

Currently, Vitamin D is a highly important metabolite as a result of the discovery of its new functions. The best way to measure the levels of vitamin D in the body is by measuring the levels of 25(OH)vitamin D, but currently there is no standardization between methods and therefore there is a great variability between them. In clinical laboratories, immunoassays are the most used methods, and only ADVIA Centaur Vitamin D Total assay© and IDS-iSYS 25-Hydroxy Vitamin D©passed the first phase of the VDSCP designed by the CDC. In this research study, these 2 immunoassays were compared, and although both passed the first phase of the VDSCP, the results showed that there still exists variability between methods. Therefore, they are not interchangeable, being it necessary to define some reference values for each method until the standardization method is finishe, and there is a good correlation between methods.

A vitamina D é um metabólito que tem muita importância na atualidade, devido ao achado de novas funções. A melhor maneira de medir os níveis de vitamina D no organismo é medir os níveis de 25(OH)vitamina D, mas hoje em dia não existe padronização entre métodos e, por isso, existe uma grande variabilidade entre eles. Nos laboratórios clínicos, os métodos mais utilizados são os imunoensaios e só a ADVIA Centaur Vitamina D Total assay e IDS-iSYS 25-Hydroxy Vitamin D, passaram a primeira fase do Vitamin D Standardization Certification Program (VDSCP) desenhado pelo Centre for diseases control (CDC). No estudo foram comparados esses dois imunoensaios, porém, apesar de ter passado a primeira fase do VDSCP os resultados mostraram que continua existindo variabilidade entre métodos e, por isso, não são intercambiáveis, sendo necessário definir valores de referência para cada método à espera de que o processo de padronização finalize, e exista boa correlação entre os diferentes métodos.

Evaluation of three commercially-available chikungunya virus immunoglobulin G immunoassays / Evaluación de tres inmunoensayos comercializados de inmunoglobulina G para el diagnóstico del virus del chikungunya

ABSTRACT The emergence of chikungunya virus in the Americas means the affected population is at risk of developing severe, chronic, rheumatologic disease, even months after acute infection. Accurate diagnostic methods for past infections are essential for differential diagnosis and consequence management. This study evaluated three commercially-available chikungunya Immunoglobulin G immunoassays by comparing them to an in-house Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay conducted by the Centers for Disease Control and Prevention (Atlanta, Georgia, United States). Results showed sensitivity and specificity values ranging from 92.8% - 100% and 81.8% - 90.9%, respectively, with a significant number of false-positives ranging from 12.5% - 22%. These findings demonstrate the importance of evaluating commercial kits, especially regarding emerging infectious diseases whose medium and long-term impact on the population is unclear.(AU)

RESUMEN Como consecuencia de la aparición del virus del chikungunya en las Américas, la población afectada corre el riesgo de padecer reumatismos crónicos graves, aun meses después de la infección aguda. Es fundamental contar con métodos precisos para diagnosticar los antecedentes de la infección a fin de elaborar un diagnóstico diferencial y abordar las manifestaciones de la fase crónica. Se han estudiado tres inmunoensayos comercializados de detección de inmunoglobulinas G para el diagnóstico del chikungunya, comparándolos con el enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA) propio. Los resultados señalan valores de sensibilidad del 92,8% al 100% y de especificidad del 81,8% al 90,9%, así como un número significativo de falsos positivos, de entre el 12,5% y el 22%.(AU)

Perfiles serológicos de hepatitis B en donantes de sangre con anti-HBc reactivos / Serological profiles of hepatitis-B HBcAb-positive blood donors

Objetivo Determinar los perfiles serológicos para el virus de hepatitis B, en donantes de sangre anti-HBc reactivo y antígeno de superficie no reactivo, provenientes de cuatro ciudades del país Métodos Se realizó un estudio prospectivo transversal, durante un período de 17 meses, aplicando el perfil serológico completo de la hepatitis B, en muestras de donantes con anti-HBc reactivo y antígeno de superficie de hepatitis B no reactivo. Los resultados fueron analizados utilizando Microsoft® Excel y Epiinfo V 3.5.1. Resultados Se encontró que el 75 % de los donantes reactivos para anti-HBc en los bancos de sangre, presentaban algún marcador adicional de exposición para el VHB; el 1,3 % de los donantes presentaban marcadores serológicos de infección crónica por hepatitis B y un caso que resultó reactivo solamente para antígeno de superficie de hepatitis B. Se halló perfil de vacunación en el 6,1 % de donantes, que fueron reactivos solamente para anticuerpo contra antígeno de superficie.Conclusiones. Se ratifica la importancia de la tamización de anti-HBc, a los donantes de sangre...(AU)

To assess the serological profiles for HBV in blood donors that were anti-HBc reactive and non-reactive to HBsAg in four Colombian cities. Materials and Methods A prospective transversal study was conducted during 17 months, applying a complete serological profile for HBV in samples from blood donors that were anti-HBc reactive and non-reactive to HBsAg, results were analyzed employing descriptive statistics using Microsoft Excel and Epiinfo V. 3.5.1. Results From donors reactive to anti-HBc, 75.0 % shown some additional infection marker for HBV. 1.3 % of blood donors had serological markers for chronical infection with hepatitis B, and a case had reactivity only for hepatitis B surface antigen (HBsAg). 6.1 % of donors showed a vaccination serological profile, only with reactivity to anti-HBsAg antibodies. Conclusions With this study, anti-HBc blood screening importance was confirmed...(AU)